Конструирование, клонирование и отбор рекомбинантных молекул ДНК
реферат по биологии и естествознанию.
дата: 24.03.2010
кол-во страниц: 38 размер: 43.68 kb |
 |
Скачать
43.68 kb
(загрузки: 216)
Просмотр:
Конструирование, клонирование и отбор рекомбинантных молекул ДНК
Евгений Diapsalmata
2
Конструирование, клонирование и отбор рекомбинантных молекул ДНК
Рассмотрим процесс получения клонированных ДНК. На первом этапе готовят фрагменты ДНК, пригодные для последующего лигирования с векторной молекулой . Следующий этап состоит в самом лигировании . Эти процессы осуществляются in vitro. Далее рекомбинантные молекулы вводят в клетки, где
они амплифицируются путем репликации . Затем проводят клонирование, отбор и дальнейшую амплификацию .
В ставки
а . Общие положения
При конструировании рекомбинантных молекул обычно используют сложные
смеси потенциальных вставок, и в результате образуется целый набор клонов, из которого путем скрининга и отбора получают нужные рекомбинантные
молекулы . Скрининг и отбор можно значительно упростить, если обогатить исходную смесь нужным сегментом ;
в этом случае для выявления искомого рекомби нанта приходится проверять значительно меньше рекомбинантных клонов. С одной стороны, для конструирования рекомбинантных ДНК можно использовать очищенные фрагменты ДНК, а с другой
- само молекулярное клонирование является наиболее простым и эффективным способом очистки фрагментов . Клонирование представляет собой также наиболее эффективный способ получения большинства фрагментов геномной ДНК в значительных количествах .
Существует три источника вставок для клонирования :
1) геномная ДНК, фрагментированная либо с помощью рестриктирующих эндонуклеаз, либо физическими методами, например с помощью ультразвука ;
2) синтетические фрагменты ДНК, полученные химическим или ферментативным методом либо путем объединения этих двух методов;
3) сегменты ДНК, ...
Показать следующую страницу
Евгений Diapsalmata
2
Конструирование, клонирование и отбор рекомбинантных молекул ДНК
Рассмотрим процесс получения клонированных ДНК. На первом этапе готовят фрагменты ДНК, пригодные для последующего лигирования с векторной молекулой . Следующий этап состоит в самом лигировании . Эти процессы осуществляются in vitro. Далее рекомбинантные молекулы вводят в клетки, где
они амплифицируются путем репликации . Затем проводят клонирование, отбор и дальнейшую амплификацию .
В ставки
а . Общие положения
При конструировании рекомбинантных молекул обычно используют сложные
смеси потенциальных вставок, и в результате образуется целый набор клонов, из которого путем скрининга и отбора получают нужные рекомбинантные
молекулы . Скрининг и отбор можно значительно упростить, если обогатить исходную смесь нужным сегментом ;
в этом случае для выявления искомого рекомби нанта приходится проверять значительно меньше рекомбинантных клонов. С одной стороны, для конструирования рекомбинантных ДНК можно использовать очищенные фрагменты ДНК, а с другой
- само молекулярное клонирование является наиболее простым и эффективным способом очистки фрагментов . Клонирование представляет собой также наиболее эффективный способ получения большинства фрагментов геномной ДНК в значительных количествах .
Существует три источника вставок для клонирования :
1) геномная ДНК, фрагментированная либо с помощью рестриктирующих эндонуклеаз, либо физическими методами, например с помощью ультразвука ;
2) синтетические фрагменты ДНК, полученные химическим или ферментативным методом либо путем объединения этих двух методов;
3) сегменты ДНК, ...
Показать следующую страницу